小(xiao)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)分(fen)離方法(fa)

小(xiao)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)分(fen)離方法(fa)
腹(fu)腔(qiang)中分(fen)離

　　1、小(xiao)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)取(qu)6周(zhou)左(zuo)右(you)的小(xiao)鼠（或(huo)600克左(zuo)右(you)的豚鼠，或(huo)3公斤(jin)左(zuo)右(you)的家(jia)兔），剃去腹(fu)部(bu)的毛並消(xiao)毒。腹腔(qiang)註射(she)1ml（豚鼠(shu)20ml，家(jia)兔200ml）無菌的液(ye)體石蠟或巰(qiu)基乙(yi)酸(suan)肉湯或(huo)4%澱粉肉湯。3～4天以後收(shou)集(ji)腹腔(qiang)細(xi)胞(bao)。

　　2、如(ru)要收(shou)集(ji)腹腔(qiang)靜(jing)置巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)，不註射(she)刺(ci)激(ji)物(wu)，直(zhi)接從(cong)壹(yi)步(bu)開(kai)始(shi)。放血處死(si)動(dong)物(wu)，以減少腹(fu)腔中(zhong)的紅(hong)細(xi)胞(bao)。消(xiao)毒腹部(bu)，沿(yan)腹中線註入(ru)3～4ml（豚鼠(shu)20～40ml，家(jia)兔50～70ml）冰(bing)中預冷(leng)的無菌PBS-H（含10U/ml肝素和(he)10%小(xiao)牛血清(qing)的PBS）。輕輕按摩腹部(bu)5分(fen)鐘。

　　3、以下均(jun)無菌操(cao)作(zuo)。剪(jian)開(kai)腹(fu)壁(bi)，用(yong)吸管(guan)吸出滲(shen)出液(ye)，再用(yong)同樣容(rong)量的預冷(leng)PBS-H沖(chong)洗腹(fu)腔(qiang)2～3次(ci)。合並(bing)滲(shen)出液(ye)於離心(xin)管(guan)中(zhong)，4℃離(li)心(xin)250×g10分(fen)鐘，去上清(qing)液(ye)。

　　4、用(yong)預冷(leng)的RPMI-1640培養液(ye)洗滌(di)細(xi)胞(bao)3次(ci)，每(mei)次(ci)4℃離(li)心(xin)250×g10分(fen)鐘，去上清(qing)液(ye)。用(yong)預冷(leng)的適量RPMI-1640培養(yang)液(ye)懸浮細(xi)胞(bao)，臺盼藍染色計數細(xi)胞(bao)並決定(ding)細(xi)胞(bao)活力。

　　家(jia)兔肺泡(pao)小(xiao)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)的分(fen)離和(he)純(chun)化

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