細(xi)胞瞬時(shi)轉染(ran)技(ji)術服(fu)務
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服(fu)務編(bian)碼(ma)
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項目(mu)名稱
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項目(mu)報價(jia)
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項目(mu)周期
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BT5001
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細(xi)胞培(pei)養
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2000元(yuan)
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1-2周
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BT5002
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細(xi)胞瞬時(shi)轉染(ran)
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3000元(yuan)
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1-2周
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BT5003
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穩(wen)定細(xi)胞系構建(jian)
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咨(zi)詢
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咨(zi)詢
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壹(yi)、服(fu)務內(nei)容
1、細(xi)胞轉染(ran)和(he)穩(wen)定表(biao)達細(xi)胞株(zhu)篩選
通(tong)過(guo)轉染(ran)試(shi)劑或電(dian)穿孔方(fang)式(shi)等(deng)方(fang)式(shi)，將(jiang)目的(de)基(ji)因導(dao)入(ru)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞或懸(xuan)浮細(xi)胞24-48小(xiao)時(shi)後，目的(de)基(ji)因即(ji)在細(xi)胞內(nei)表(biao)達。此時(shi)為了建(jian)立穩(wen)定細(xi)胞系，可(ke)根(gen)據不同(tong)基因載(zai)體(ti)中(zhong)所含(han)的(de)抗(kang)性(xing)標(biao)記，選用(yong)相(xiang)應(ying)的(de)藥物(wu)對靶細(xi)胞進行篩選，從(cong)而得(de)到穩(wen)定表(biao)達外源基(ji)因的(de)細(xi)胞克隆(long)。觀察目(mu)的(de)基(ji)因及(ji)其表(biao)達蛋白(bai)在某(mou)種(zhong)細(xi)胞中的(de)功(gong)能(neng)（短時間(jian)即(ji)可(ke)進行觀察，但(dan)效應(ying)會很快丟(diu)失(shi)）。
2、針對不同(tong)種類(lei)細(xi)胞使用(yong)藥物(wu)，低(di)氧，壓(ya)力(li)等外(wai)源因(yin)素進行刺激等(deng)處(chu)理(li)，建(jian)立相(xiang)關(guan)的(de)細(xi)胞模(mo)型(xing)，從(cong)而進行後續的(de)研(yan)究工(gong)作。
二(er)、樣(yang)品要(yao)求(qiu)（樣品處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)見附件(jian)）
1、幹(gan)冰(bing)運(yun)輸：取對數生(sheng)長(chang)期的(de)細(xi)胞，消(xiao)化(hua)後低(di)速(su)離(li)心(xin)1000rpm，5min收集細(xi)胞，加入(ru)適(shi)量(liang)配(pei)制好(hao)的(de)凍(dong)存液後吹打(da)均(jun)勻(yun)。將(jiang)細(xi)胞分裝入(ru)凍(dong)存(cun)管中，標(biao)明細(xi)胞的(de)名稱、細(xi)胞代(dai)次(ci)、凍存(cun)時(shi)間(jian)及(ji)操(cao)作(zuo)者；放4℃冰(bing)箱30min，-20℃30min到1h，-80℃過(guo)液，然後放入(ru)液氮罐(guan)；細(xi)胞數目(mu)不(bu)少於(yu)5×106/ml；
2、常(chang)溫(wen)運(yun)輸：細(xi)胞貼壁(bi)覆蓋瓶底(di)面積達40%以(yi)上(shang)時，裝滿培(pei)養液，瓶口用(yong)封(feng)口膜(mo)封(feng)好(hao)，裝入(ru)盒(he)子(zi)，盒子裏(li)用泡(pao)沫(mo)或棉(mian)花塞(sai)滿，讓瓶子固(gu)定在盒(he)子(zi)中。
三(san)、服(fu)務特點(dian)
1、針對不同(tong)細(xi)胞系篩選合適的(de)轉染(ran)試(shi)劑和質粒濃(nong)度配(pei)比，提(ti)高(gao)轉染(ran)效(xiao)率(lv)和蛋白(bai)表(biao)達量(liang)
2、豐(feng)富的(de)抗(kang)生(sheng)素(su)篩選經(jing)驗和(he)單(dan)細(xi)胞克隆(long)鑒(jian)定方(fang)法(fa)提(ti)高(gao)實驗效(xiao)率(lv)
3、構建(jian)的(de)穩(wen)定表(biao)達細(xi)胞株(zhu)可(ke)穩(wen)定傳代(dai)，極(ji)少發(fa)生(sheng)性(xing)狀丟(diu)失(shi)
四(si)、收費標(biao)準
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服(fu)務項目(mu)
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收費標(biao)準￥
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實驗周期
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蛋白(bai)瞬時表(biao)達或敲(qiao)低(di)
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基(ji)因(yin)表(biao)達或敲(qiao)低(di)載(zai)體(ti)構建(jian)
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請參見載(zai)體構建(jian)目錄
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2-3周
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質粒大提(ti)（含(han)去內(nei)毒(du)素(su)）
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700/質粒
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1周
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載(zai)體(ti)轉染(ran)
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3000/樣(yang)品
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1周
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Western Blot檢測(ce)蛋白(bai)表(biao)達或敲(qiao)低(di)
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2000/目(mu)的(de)蛋白(bai)/膜(mo)
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2周
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蛋白(bai)穩(wen)定表(biao)達細(xi)胞株(zhu)構建(jian)（混(hun)合克隆(long)）
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表(biao)達載體(ti)構建(jian)
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請參見載(zai)體構建(jian)目錄
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2-3周
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質粒大提(ti)（含(han)去內(nei)毒(du)素(su)）
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700/質粒
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1周
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轉染(ran)和(he)抗(kang)生(sheng)素(su)篩選
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40000/細(xi)胞系
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3-4周
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Western Blot檢測(ce)穩(wen)定細(xi)胞株(zhu)蛋白(bai)表(biao)達
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2000/目(mu)的(de)蛋白(bai)/膜(mo)
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2周
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蛋白(bai)穩(wen)定表(biao)達細(xi)胞株(zhu)構建(jian)（單克隆(long)）
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表(biao)達載體(ti)構建(jian)
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請參見載(zai)體構建(jian)目錄
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2-3周
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質粒大提(ti)（含(han)去內(nei)毒(du)素(su)）
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700/質粒
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1周
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轉染(ran)和(he)抗(kang)生(sheng)素(su)篩選
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50000/細(xi)胞系
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6-8周
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Western Blot檢測(ce)穩(wen)定細(xi)胞株(zhu)蛋白(bai)表(biao)達
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2000/目(mu)的(de)蛋白(bai)/膜(mo)
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2周
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蛋白(bai)敲低(di)細(xi)胞系構建(jian)（單克隆(long)）
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shRNA表(biao)達載體(ti)的(de)構建(jian)
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請參見載(zai)體構建(jian)目錄
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2-3周
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質粒大提(ti)（含(han)去內(nei)毒(du)素(su)）
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700/質粒
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1周
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轉染(ran)和(he)抗(kang)生(sheng)素(su)篩選
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60000/細(xi)胞系
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6-8周
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Western Blot檢測(ce)敲低(di)細(xi)胞株(zhu)蛋白(bai)表(biao)達
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2000/目(mu)的(de)蛋白(bai)/膜(mo)
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2周
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蛋白(bai)真核表(biao)達（分泌(mi)表(biao)達）
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分泌(mi)型(xing)表(biao)達載體(ti)的(de)構建(jian)
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請參見載(zai)體構建(jian)目錄
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2-3周
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質粒大提(ti)（含(han)去內(nei)毒(du)素(su)）
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700/質粒
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1周
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細(xi)胞轉染(ran)
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3000/質粒
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2周
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蛋白(bai)表(biao)達檢測(ce)（Western Blot或 ELISA）
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2000/目(mu)的(de)蛋白(bai)/膜(mo)；600/板
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2周
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蛋白(bai)表(biao)達和純(chun)化
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20000/mg
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2周
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五、客戶提(ti)供(gong)材料(liao)
1、待克隆(long)基(ji)因(yin)和(he)載體信息，待敲低(di)基(ji)因(yin)信息和shRNA序(xu)列(lie)信息（如無相(xiang)關(guan)shRNA序(xu)列(lie)信息，本公(gong)司(si)可(ke)代(dai)為(wei)設計並收取相(xiang)關(guan)費(fei)用；
2、待轉染(ran)細(xi)胞株(zhu)(如需使用常(chang)用腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞株(zhu)，如293/293T、HeLa等(deng)可(ke)由(you)本公(gong)司(si)提(ti)供(gong))；
3、陽性(xing)對照(zhao)樣品（盡量(liang)提(ti)供(gong)）
4、相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)（可(ke)選）
六(liu)、提(ti)交給(gei)客(ke)戶結(jie)果(guo)
1、構建(jian)完(wan)成的(de)載(zai)體和甘油(you)菌株(zhu)；
2、完(wan)整測(ce)序報(bao)告和序列(lie)堿(jian)基(ji)圖
3、載(zai)體(ti)真核表(biao)達鑒定結(jie)果(guo)
4、載(zai)體(ti)真核表(biao)達蛋白(bai)
5、穩(wen)定表(biao)達細(xi)胞株(zhu)>1×107
6、穩(wen)定敲低(di)細(xi)胞株(zhu)>1×107
7、完(wan)整實驗報(bao)告(gao)（包(bao)括(kuo)基因(yin)擴(kuo)增(zeng)圖，細(xi)胞株(zhu)過表(biao)達和敲(qiao)低(di)檢測(ce)結(jie)果(guo)圖等(deng)）
