Western Blot-抗體檢(jian)測技術服(fu)務

壹、服(fu)務內容

1、從動物(wu)細(xi)胞、人(ren)或動(dong)物組織、細菌(jun)、植(zhi)物等(deng)樣品(pin)中提(ti)取蛋白，重(zhong)組蛋白、血(xue)清、培(pei)養(yang)上(shang)清等(deng)樣(yang)品(pin)

2、對(dui)樣品(pin)中(zhong)蛋白進(jin)行(xing)半(ban)定量分(fen)析

3、Western blot檢(jian)測

（1） 電泳：聚丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺凝(ning)膠(jiao)（SDS-PAGE）分(fen)離(li)蛋白樣(yang)品(pin)

（2） 濕(shi)法轉(zhuan)印(yin)（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 雜交：用抗體鑒(jian)定(ding)膜(mo)上的特(te)定蛋白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化學發(fa)光(guang)檢(jian)測（ECL），膠(jiao)片(pian)曝光，TotalLab Quant軟(ruan)件(jian)讀取IOD值（可(ke)選(xuan)）

4、預實驗(yan)及(ji)正式(shi)實驗(yan)服(fu)務：幫(bang)助客戶設(she)計樣品(pin)上樣(yang)順(shun)序以(yi)符合(he)論(lun)文(wen)發(fa)表要(yao)求

5、免(mian)費(fei)進(jin)行(xing)蛋白內參檢(jian)測（所(suo)有內參抗體均免(mian)費(fei)提(ti)供(gong)）

二(er)、樣(yang)品(pin)要(yao)求

1、細胞＞1×107；組織＞30mg；細菌(jun)濕(shi)重＞1mg；植(zhi)物＞100mg；血(xue)清＞50ul；等(deng)

2、樣品蛋白濃(nong)度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣(yang)品(pin)

四、客戶提(ti)供(gong)材料(liao)

1、新鮮(xian)或正確保(bao)存的(de)樣品(pin)（按照我(wo)們(men)的(de)要(yao)求提(ti)供(gong)）

2、目的(de)蛋白壹(yi)抗：我(wo)們(men)可(ke)以給客戶免(mian)費(fei)提(ti)供(gong)抗體查找(zhao)服(fu)務

3、陽性對(dui)照樣品（盡量提(ti)供(gong)）

4、相關文(wen)獻（可(ke)選(xuan)）

五(wu)、提(ti)交(jiao)給客戶結(jie)果(guo)

1、預實驗(yan)曝(pu)光結(jie)果(guo)（膠(jiao)片(pian)及(ji)掃(sao)描(miao)圖(tu)），預實(shi)驗采取3個壹(yi)抗稀釋度

2、正式(shi)實驗(yan)曝光結(jie)果(guo)（膠(jiao)片(pian)及(ji)掃(sao)描(miao)圖(tu)）

3、完(wan)整實(shi)驗報(bao)告(gao)

4、IOD值分(fen)析報(bao)告(gao)（可(ke)選(xuan)）

六、服(fu)務項(xiang)目說明

客戶要(yao)求加(jia)可(ke)曝光(guang)marker的(de)，需(xu)事先說明，並按(an)照可(ke)曝光(guang)項(xiang)目收(shou)費(fei)

1、提(ti)供(gong)的(de)蛋白量與目的(de)待(dai)檢(jian)測的(de)蛋白數(shu)量有關，蛋白數(shu)量增(zeng)加(jia)相應(ying)的樣(yang)品量也(ye)要(yao)增(zeng)加(jia)

2、胞漿(jiang)、胞核蛋白抽(chou)提(ti)樣(yang)品(pin)來(lai)源(yuan)為：哺(bu)乳(ru)動物細胞、動(dong)物(wu)組織。如果(guo)1個樣品分(fen)別提(ti)取胞漿(jiang)、胞核蛋白後，蛋白定(ding)量時(shi)以(yi)2個樣品計算(suan)

3、每張(zhang)膜(mo)樣品數(shu)量為(wei)1-8個(ge)，不足8個以(yi)8個收(shou)取。9-16個樣(yang)品為(wei)2張(zhang)膜(mo)，17-24個樣品為3張(zhang)膜(mo)；以此類推(tui)

舉(ju)例(li)：7個樣品，1個(ge)目的(de)蛋白，算(suan)1張(zhang)膜(mo)；有9個樣(yang)品(pin)，1個目的(de)蛋白，算(suan)2張(zhang)膜(mo)

      7個樣品(pin)，2個(ge)目的(de)蛋白，算(suan)2張(zhang)膜(mo)，有9個樣(yang)品(pin)，2個目的(de)蛋白，算(suan)4張(zhang)膜(mo)

以上為(wei)壹(yi)般(ban)算(suan)法。如果(guo)客戶樣品(pin)數(shu)量需(xu)要(yao)按照組別(bie)等(deng)來進行上樣(yang)時需要(yao)重新確定每張(zhang)膜(mo)的上樣量及(ji)膜(mo)的張(zhang)數(shu)

4、選(xuan)擇部(bu)分(fen)樣品(pin)進(jin)行(xing)預實驗(yan)，參考(kao)目的(de)蛋白壹(yi)抗說明書進(jin)行(xing)3個(ge)稀(xi)釋(shi)度的(de)預(yu)實驗

5、向客戶反饋(kui)預實(shi)驗結(jie)果(guo)，等待客戶確認(ren)預實驗結(jie)果(guo)後確定是(shi)否(fou)進行正式(shi)實驗(yan)

6、請您提(ti)供(gong)質(zhi)量保(bao)證(zheng)的(de)壹(yi)抗（或委(wei)托我(wo)公(gong)司(si)代購）。抗體的使(shi)用量通(tong)過(guo)預實驗後進行(xing)確認(ren)，壹般(ban)不回(hui)收(shou)使(shi)用壹(yi)抗

7、如果(guo)需要(yao)對(dui)膜(mo)上目的(de)蛋白進(jin)行(xing)抗體剝離(li)（洗(xi)脫或(huo)者(zhe) stripping）的，請(qing)提(ti)前說明

8、建(jian)議(yi)提(ti)供(gong)目的(de)蛋白陽性表達(da)樣(yang)品(pin)（純(chun)蛋白、有陽性表達(da)的(de)細(xi)胞或(huo)組織、商品化的陽性對(dui)照產品(pin)等(deng)）作(zuo)為(wei)陽性對(dui)照

9、免(mian)費(fei)內參檢(jian)測為(wei)：beta-actin，beta-tubulin，GAPDH，Histone H3， Lamin B1等(deng)

10、如需進壹步(bu)數(shu)據(ju)分(fen)析：TotalLab Quant專業軟(ruan)件(jian)讀取IOD值、條(tiao)帶的(de)Normalization處理(li)、以及(ji)發(fa)表論(lun)文(wen)時所(suo)用條(tiao)帶的(de)處理(li)，請另(ling)詢價

11、對(dui)條(tiao)帶結(jie)果(guo)有特(te)殊要(yao)求，請(qing)另詢價

12、雙方簽訂(ding)合(he)同(tong)後，收取70%首(shou)付(fu)後啟動(dong)預(yu)實(shi)驗(yan)

13、WB特(te)殊要(yao)求請(qing)咨詢