細胞培(pei)養技(ji)術服務(wu)

壹、服務(wu)內容

1、細胞(bao)轉(zhuan)染(ran)和穩(wen)定(ding)表達(da)細胞(bao)株(zhu)篩(shai)選(xuan)

通過轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑或(huo)電(dian)穿孔(kong)方(fang)式等(deng)方(fang)式，將(jiang)目的基(ji)因(yin)導入(ru)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)或(huo)懸浮(fu)細胞24-48小時後，目的基(ji)因(yin)即在細(xi)胞內表達(da)。此(ci)時為(wei)了建立(li)穩(wen)定(ding)細(xi)胞系，可根據不同基(ji)因(yin)載體(ti)中所含(han)的抗(kang)性(xing)標(biao)記，選用相(xiang)應的藥物(wu)對靶細(xi)胞進行(xing)篩(shai)選(xuan)，從(cong)而(er)得到穩(wen)定(ding)表達(da)外源基(ji)因(yin)的細(xi)胞(bao)克(ke)隆。觀察(cha)目的基(ji)因(yin)及其(qi)表達(da)蛋白(bai)在某種(zhong)細胞中的功能（短(duan)時間(jian)即(ji)可進行(xing)觀(guan)察(cha)，但(dan)效應會很快(kuai)丟(diu)失(shi)）。

2、針對不同種(zhong)類(lei)細胞(bao)使(shi)用(yong)藥物(wu)，低(di)氧(yang)，壓(ya)力(li)等外源因(yin)素進行(xing)刺(ci)激(ji)等(deng)處(chu)理，建立(li)相關(guan)的細(xi)胞(bao)模(mo)型(xing)，從(cong)而(er)進行(xing)後(hou)續(xu)的研(yan)究工作。

二、樣(yang)品(pin)要求（樣(yang)品(pin)處(chu)理及保(bao)存(cun)見附件）

1幹(gan)冰(bing)運(yun)輸：取對(dui)數(shu)生長期(qi)的細(xi)胞(bao)，消化後(hou)低(di)速離(li)心1000rpm，5min收集細(xi)胞(bao)，加入(ru)適量(liang)配制好(hao)的凍(dong)存(cun)液後(hou)吹打均勻(yun)。將(jiang)細(xi)胞(bao)分裝(zhuang)入(ru)凍(dong)存管(guan)中，標(biao)明細(xi)胞的名(ming)稱(cheng)、細胞(bao)代次(ci)、凍(dong)存(cun)時間(jian)及操(cao)作(zuo)者；放4℃冰(bing)箱(xiang)30min，-20℃30min到1h，-80℃過液，然(ran)後(hou)放(fang)入(ru)液氮(dan)罐(guan)；細胞(bao)數目不少(shao)於(yu)5×106/ml；

2常溫(wen)運(yun)輸：細(xi)胞貼(tie)壁(bi)覆(fu)蓋瓶(ping)底(di)面(mian)積達(da)40%以上(shang)時，裝滿培養液，瓶(ping)口用(yong)封口膜(mo)封好(hao)，裝(zhuang)入盒(he)子(zi)，盒(he)子(zi)裏(li)用(yong)泡沫(mo)或(huo)棉(mian)花(hua)塞滿，讓(rang)瓶子(zi)固(gu)定(ding)在盒(he)子(zi)中。

三、服務(wu)特(te)點(dian)

1、針對不同細胞系(xi)篩(shai)選(xuan)合(he)適的轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑和質粒(li)濃度配比，提高轉染(ran)效率(lv)和蛋白(bai)表達(da)量

2、豐(feng)富的抗(kang)生(sheng)素篩(shai)選(xuan)經(jing)驗和單(dan)細(xi)胞(bao)克隆鑒定(ding)方(fang)法提高實驗效率(lv)

3、構(gou)建的穩(wen)定(ding)表達(da)細胞(bao)株(zhu)可穩(wen)定(ding)傳(chuan)代，極少(shao)發(fa)生性狀丟(diu)失(shi)

四、收(shou)費(fei)標(biao)準(zhun)

五(wu)、客戶提供(gong)材料(liao)

1、待克(ke)隆基(ji)因(yin)和載體(ti)信息(xi)，待敲(qiao)低(di)基(ji)因(yin)信息(xi)和shRNA序列(lie)信(xin)息(xi)（如(ru)無相(xiang)關(guan)shRNA序列(lie)信(xin)息(xi)，本公司可代(dai)為(wei)設計(ji)並收(shou)取相(xiang)關(guan)費(fei)用(yong)）；

2、待轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞株(zhu)（如(ru)需(xu)使(shi)用(yong)常(chang)用腫瘤細胞(bao)株(zhu)，如293/293T、HeLa等可由(you)本公司提供(gong)）；

3、陽性(xing)對(dui)照樣品(pin)（盡(jin)量提供(gong)）

4、相關(guan)文獻(xian)（可選(xuan)）

六、提交給客戶結果

1、構(gou)建完成(cheng)的載(zai)體(ti)和甘(gan)油菌株(zhu)；

2、完整(zheng)測序報(bao)告和序列(lie)堿基(ji)圖

3、載體(ti)真(zhen)核表達(da)鑒定(ding)結(jie)果

4、載體(ti)真(zhen)核表達(da)蛋白(bai)

5、穩(wen)定(ding)表達(da)細胞(bao)株(zhu)>1×107

6、穩(wen)定(ding)敲(qiao)低(di)細(xi)胞(bao)株(zhu)>1×107

7、完整(zheng)實驗報(bao)告（包(bao)括(kuo)基(ji)因(yin)擴(kuo)增(zeng)圖，細胞(bao)株過表達(da)和敲(qiao)低(di)檢(jian)測(ce)結(jie)果圖等）