3T6小鼠胚(pei)胎(tai)成纖維細胞培(pei)養方(fang)法(fa)

3T6小鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細胞培(pei)養方(fang)法(fa)
分離(li)培(pei)養

　　3T6小鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細胞的(de)分(fen)離(li)培(pei)養壹開始並(bing)不涉(she)及(ji)成骨作(zuo)用(yong)，而(er)主(zhu)要(yao)是(shi)用(yong)於(yu)研(yan)究(jiu)細胞的(de)老(lao)化(hua)、各(ge)種(zhong)外來(lai)因(yin)子(zi)對細胞的(de)損(sun)傷(shang)、細(xi)胞在(zai)體(ti)外條(tiao)件(jian)下(xia)的(de)惡性轉(zhuan)化(hua)、以(yi)及(ji)某些先天性代謝異常(chang)、酶(mei)缺(que)陷(xian)等(deng)。由於(yu)皮膚成纖維細胞易(yi)於(yu)獲(huo)取，又易於(yu)在(zai)體(ti)外生長，皮膚成纖維細胞培(pei)養已在(zai)基(ji)礎(chu)醫(yi)學(xue)和(he)臨(lin)床(chuang)醫(yi)學(xue)研(yan)究(jiu)中(zhong)得到(dao)較(jiao)廣泛的(de)運用(yong)，其分(fen)離(li)培(pei)養技術已相對成熟(shu)，對其體(ti)外生長規(gui)律也(ye)有了較(jiao)**的(de)認(ren)識(shi)。

原代(dai)培(pei)養

　　3T6小鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細胞的(de)原代(dai)培(pei)養可用(yong)酶(mei)消(xiao)化(hua)法(fa)或(huo)組織塊(kuai)法，其(qi)中(zhong)組織(zhi)塊(kuai)法又(you)因其(qi)操作(zuo)簡(jian)便(bian)、條(tiao)件易於(yu)控(kong)制而(er)應(ying)用(yong)更(geng)為(wei)普遍。通(tong)常(chang)，以(yi)酶(mei)消(xiao)化(hua)法(fa)獲(huo)得的(de)成纖維細胞懸液在(zai)接(jie)種後5～10min即可(ke)見(jian)細胞以(yi)偽(wei)足初期(qi)附著，與(yu)底(di)物形成壹(yi)些接(jie)觸點(dian)；然後細胞逐(zhu)漸(jian)呈(cheng)放(fang)射狀(zhuang)伸展(zhan)，胞體(ti)的(de)中(zhong)心部(bu)分亦(yi)隨之(zhi)變扁(bian)平(ping)；*快者(zhe)大約在(zai)接(jie)種後30min，細胞貼(tie)附底(di)物即較(jiao)為(wei)完(wan)全(quan)，呈(cheng)現(xian)成纖維細胞的(de)形態。采(cai)用(yong)組織(zhi)塊(kuai)法則(ze)大約在(zai)接(jie)種後2～3天到1周(zhou)左(zuo)右，在(zai)接(jie)種的(de)皮膚組織塊(kuai)周(zhou)圍(wei)長出細(xi)胞。待(dai)細胞融(rong)合(he)成片(pian)，鋪(pu)滿培(pei)養容器(qi)底(di)壁(bi)大(da)部(bu)分(fen)時(shi)即可(ke)進(jin)行傳代(dai)。壹(yi)般(ban)都(dou)采(cai)用(yong)胰蛋白(bai)酶(mei)(trypsin)，將(jiang)成纖維細胞從底(di)壁(bi)消(xiao)化(hua)下(xia)來後分瓶作(zuo)傳代培(pei)養。成纖維細胞在(zai)體(ti)外培(pei)養條件(jian)下(xia)能(neng)保(bao)持良(liang)好(hao)的(de)分(fen)裂(lie)增(zeng)殖(zhi)能(neng)力(li)。細(xi)胞分(fen)裂(lie)時(shi)變為(wei)球(qiu)形；分裂(lie)後又平鋪在(zai)附著物的(de)表(biao)面(mian)成為(wei)有(you)突起(qi)的(de)扁(bian)平(ping)細(xi)胞。體(ti)外培(pei)養的(de)成纖維細胞，其(qi)生命期限(xian)與(yu)物種等(deng)因(yin)素(su)有(you)關。

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