人乳腺管癌(ai)細(xi)胞(bao)的(de)傳代(dai)及凍(dong)存

人乳腺管癌(ai)細(xi)胞(bao)的(de)傳代(dai)及凍(dong)存

細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

　　1）細(xi)胞(bao)(人乳腺管癌(ai)細(xi)胞(bao))生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的80%面積(ji)時，棄(qi)25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用PBS清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

　　2）添(tian)加0.25%胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)消化液約1ml至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)完全(quan)培養(yang)液終(zhong)止(zhi)消化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)15ml離心管中(zhong)，1000rpm離心5min；

　　3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細(xi)胞(bao)用12ml完全(quan)培養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按1:2比(bi)例進行(xing)分瓶傳代(dai)，*後(hou)放入(ru)37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

　　4）待細(xi)胞(bao)完(wan)全(quan)貼壁(bi)後(hou)，觀(guan)察(cha)培養(yang)結果，之(zhi)後(hou)進行(xing)換(huan)液培養(yang)或(huo)傳代(dai)。

細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

　　1）細(xi)胞(bao)(人乳腺管癌(ai)細(xi)胞(bao))生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的80%面積(ji)時，棄(qi)25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用PBS清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

　　2）添(tian)加0.25%胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)消化液約1ml至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)完全(quan)培養(yang)液終(zhong)止(zhi)消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)15ml離心管中(zhong)，1000rpm離心5min；

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