Ana-1小鼠(shu)巨(ju)噬(shi)細(xi)胞的(de)原(yuan)代培(pei)養及(ji)實驗(yan)步(bu)驟
(1) (Ana-1小鼠(shu)巨(ju)噬(shi)細(xi)胞)實(shi)驗(yan)開(kai)始前(qian)向小鼠(shu)腹腔註(zhu)射(she)0.5ml含(han)40μg刀豆(dou)球(qiu)蛋白(bai)a的(de)磷(lin)酸鹽緩(huan)沖液（PBS）。
(2) 3天(tian)後(hou)，斷頸處(chu)死(si)小鼠(shu)，75%酒精消毒(du)小鼠(shu)皮(pi)膚(fu)。
(3) 置動物於(yu)解(jie)剖(pou)臺(tai)上(shang)，用針(zhen)頭固(gu)定(ding)四肢(zhi)，雙(shuang)手持鑷(nie)撕(si)開(kai)皮(pi)膚(fu)拉向兩(liang)側，暴露(lu)出(chu)腹膜(mo)，但(dan)勿傷(shang)及(ji)腹膜(mo)壁(bi)。
(4) 再用70％酒精擦洗(xi)腹膜(mo)壁(bi)後，用註射(she)器(qi)吸(xi)10ml 無(wu)菌PBS液(ye)註(zhu)入(ru)腹腔中(zhong)，同(tong)時從(cong)兩(liang)側用手指(zhi)揉(rou)壓腹膜(mo)壁(bi)，令液體在(zai)腹腔內(nei)充分流(liu)動。
(5) 用針(zhen)頭輕(qing)輕(qing)挑起腹壁(bi)，使動物體(ti)微傾(qing)向壹(yi)側，使腹腔中(zhong)液(ye)體(ti)集於針(zhen)頭下吸(xi)取入(ru)針(zhen)管(guan)內。
(6) 小(xiao)心(xin)拔(ba)出(chu)針(zhen)頭，把(ba)液(ye)體註(zhu)入(ru)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000r/min 4℃離(li)心(xin)10分鐘，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，重(zhong)復兩(liang)次(ci)，加(jia)入(ru)完全(quan)培(pei)養液(ye)重(zhong)懸。
(7) 將(jiang)濾(lv)液(ye)進(jin)行臺(tai)盼(pan)藍拒染(ran)試(shi)驗(yan),(Ana-1小(xiao)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞)血(xue)細(xi)胞計(ji)數板鏡下(xia)計(ji)數。以(yi) 8.0 ×104至(zhi) 1.0 ×105/mL的(de)密(mi)度將細(xi)胞以(yi) 400µl/孔(kong)接種到預先(xian)用L-多聚(ju)賴(lai)氨酸包被的(de)24 孔培(pei)養板(ban)或(huo) 100µl/孔接種 96 孔培(pei)養板(ban)。
(8) 用含(han)10%胎(tai)牛血(xue)清(qing)的(de)RPMI 1640培(pei)養基培(pei)養，細(xi)胞培(pei)養24-48 h直到融(rong)合(he)。
註意事(shi)項(xiang)：
腹腔註(zhu)射(she)時(shi)PBS可(ke)以(yi)用20ML註射(she)器(qi)，每(mei)只(zhi)老(lao)鼠(shu)註(zhu)射10ML；切勿註射入(ru)內臟，會使腹腔液(ye)中(zhong)紅(hong)細(xi)胞增多(duo)，同(tong)時可(ke)能(neng)汙染(ran)；註射(she)後(hou)，要(yao)多(duo)揉(rou)壹(yi)下再(zai)取液(ye)；
尊(zun)敬(jing)的(de)客(ke)戶(hu)：
本公(gong)司(si)還有(you)AAV-293細(xi)胞、
Calu-1細(xi)胞、LLC-MK2細(xi)胞產(chan)品(pin)，您(nin)可(ke)以(yi)通(tong)過網頁(ye)撥(bo)打本(ben)公(gong)司(si)的(de)服務電(dian)話(hua)了(le)解(jie)更(geng)多產(chan)品(pin)的(de)詳細(xi)信息(xi)，至(zhi)善至(zhi)美(mei)的(de)服務是我(wo)們(men)的(de)追(zhui)求(qiu)，歡迎(ying)新(xin)老客(ke)戶(hu)放心(xin)選(xuan)購自(zi)己(ji)心(xin)儀產品(pin)，我(wo)們(men)將(jiang)竭誠(cheng)為(wei)您服務！
