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PCR與(yu)克隆載體(ti)構(gou)建
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常(chang)規(gui)小(xiao)鼠多(duo)抗(kang)血清制備
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兔(tu)多(duo)克隆抗(kang)血清制備、兔(tu)磷(lin)酸(suan)化(hua)多(duo)克隆抗(kang)體(ti)制備
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Y1細胞的註(zhu)意事項(xiang)
Y1細胞的註(zhu)意事項(xiang):
1. 收(shou)到Y1細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao),培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象,若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象發生(sheng)請及(ji)時和(he)我們。
2.先(xian)不(bu)開(kai)瓶(ping)蓋,瓶(ping)身擦(ca)拭酒精後(hou)放在(zai)培(pei)養(yang)箱(xiang)靜置數小時(shi)(4h左(zuo)右(you)),穩(wen)定(ding)細胞狀(zhuang)態(tai),切忌在(zai)溫(wen)箱(xiang)內靜置過夜(ye)。
3.靜置後(hou)鏡檢,拍照,記錄細胞狀(zhuang)態(tai)。建議(yi)傳代後(hou)也(ye)拍(pai)照記錄細胞生長情(qing)況。
4. 貼(tie)壁細胞:若(ruo)細胞密(mi)度(du)超過80%,可(ke)正常(chang)傳代;若(ruo)未超(chao)過80%,收(shou)集細胞瓶(ping)內的培(pei)養(yang)基(ji),留(liu)8ml繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)至(zhi)80%左右再傳代,瓶(ping)蓋可(ke)稍(shao)微擰(ning)松(song)。
5. Y1細胞細胞瓶(ping)內的培(pei)養(yang)基(ji)含血(xue)清和雙抗(kang),可收(shou)集後(hou)4℃保(bao)存(cun)備用,可補加(jia)2%血清。剛開始傳代時建議(yi)壹半用細胞瓶(ping)內的培(pei)養(yang)基(ji),壹半用客戶自備(bei)的培(pei)養(yang)基(ji),使(shi)細胞逐漸適(shi)應(ying)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian),以(yi)免(mian)因不(bu)適(shi)應(ying)而(er)造(zao)成(cheng)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)不(bu)佳(jia)。
6. 細胞胰酶消(xiao)化(hua)液(ye)建議(yi)使(shi)用PBS配(pei)制
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常(chang)規(gui)小(xiao)鼠多(duo)抗(kang)血清制備
小(xiao)鼠(shu)雜(za)交(jiao)瘤(liu)細胞株制備
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