人臍(qi)靜脈(mai)血(xue)管內皮細胞的接種培養

人(ren)臍靜(jing)脈血(xue)管內皮細胞的接種培養

細胞接種培養

　　1、細胞接種：

　　（1）、包(bao)被液(ye)：用(yong)去(qu)離(li)水(shui)配(pei)制0.5%明(ming)膠溶(rong)液(ye)，過濾除菌(jun)。

　　（2）、人(ren)臍(qi)靜(jing)脈血(xue)管內皮細胞培養瓶包被：取(qu)2-4個T25培養瓶，每(mei)個培養瓶加2－3ml0.5%明膠溶(rong)液(ye)，搖勻使包被液布(bu)滿(man)培養瓶底面，置(zhi)37℃2小(xiao)時或(huo)放置過夜。

　　（3）、接種細胞：人臍靜脈(mai)血(xue)管內皮細胞接種前(qian)吸凈(jing)包(bao)被(bei)液，按(an)2500－5000個細胞/cm接種細胞（1支(zhi)5×10個細胞可接種2-4個培養瓶），每(mei)瓶加培養液(ye)3-5ml,搖勻後置37℃5%CO2培養箱(xiang)內培養24小(xiao)時，此(ci)時細胞已(yi)完(wan)全貼壁(bi)，更換培養液(ye)後繼續在37℃5%CO2培養箱(xiang)內培養。

　　（4）、擴(kuo)大培養：壹(yi)般(ban)每(mei)周(zhou)更(geng)換(huan)培養液(ye)2次，至細胞長至覆蓋(gai)培養面(mian)的70-80%可(ke)進(jin)行傳代(dai)或(huo)凍(dong)存(cun)。

細胞凍存

　　調整(zheng)細胞數2-5×10個/ml，按(an)含(han)細胞的RPMI-1640液(ye)ml數(shu)，配制(zhi)等量(liang)的凍(dong)存(cun)液。凍(dong)存液(ye)中(zhong)FBS占80%，DMSO占20%。例：含(han)細胞的RPMI-1640液(ye)為(wei)8ml，應(ying)配(pei)凍存液(ye)8ml，其中(zhong)FBS為(wei)6.4ml,DMSO為(wei)1.6ml，混(hun)勻。置細胞懸液於(yu)冰浴(yu)中(zhong)，逐(zhu)滴加入凍存(cun)液(ye)，邊加邊搖動。加完後用吸管吹打混勻。於(yu)冰浴(yu)中(zhong)分(fen)裝細胞於(yu)凍存(cun)管中(zhong)，1.8ml/管，再將(jiang)凍存(cun)管置於(yu)凍存(cun)盒內置-80℃冰箱(xiang)，24小(xiao)時後轉入液氮(dan)中(zhong)保(bao)存。

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