RTE細胞凍存註(zhu)意事(shi)項

RTE細胞凍存註(zhu)意事(shi)項
　　（1）RTE細胞凍存前(qian)細胞狀態，細胞*好(hao)在(zai)對(dui)數生長(chang)期(qi)，細胞密度(du)適合(he)，剛剛發(fa)生細胞融合，過密或連(lian)成(cheng)片(pian)的(de)細胞狀態不好(hao)，而且(qie)消(xiao)化(hua)時(shi)不容易(yi)分(fen)散(san)；

　　（2）RTE細胞凍存的(de)密(mi)度(du)不宜過低，10的(de)6次方(fang)-7次方(fang)的(de)數(shu)量級(ji)比(bi)較(jiao)好(hao)，我(wo)凍(dong)存的(de)細胞壹般(ban)T25培(pei)養(yang)瓶(ping)（5*107），壹瓶(ping)凍壹管（1.5ml凍存管），10cm培(pei)養(yang)皿(min)（大(da)概10的(de)8次方(fang)個(ge)細胞）分(fen)成(cheng)兩管。

　　（3）RTE細胞消(xiao)化(hua)和吹打(da)，切忌胰(yi)酶消(xiao)化(hua)過度(du)，吹打(da)不可(ke)太用力，*好(hao)不要吹出好(hao)多(duo)泡(pao)泡(pao)。消(xiao)化(hua)後立(li)即(ji)加(jia)入(ru)完(wan)全培養(yang)基吹打(da)哦，不是(shi)加(jia)入(ru)凍(dong)存液再(zai)吹打(da)。

　　（4）離(li)心(xin)後加(jia)入(ru)凍(dong)存液。凍(dong)存液中(zhong)FBS的(de)用量對(dui)於(yu)腫(zhong)瘤細胞株而言(yan)要求不是(shi)很(hen)嚴(yan)格(ge)，我從(cong)10%-90%都用過，問題不大(da)，個人(ren)認(ren)為(wei)10%-20%可(ke)以了，能(neng)節約處就節約點嘛！另(ling)外(wai)，凍存液可(ke)以在(zai)處理細胞前(qian)配置(zhi)，放在(zai)4度(du)冰箱(xiang)預冷。細胞離(li)心(xin)後直(zhi)接(jie)用預冷的(de)凍(dong)存液重懸，移入(ru)凍(dong)存管。

　　（5）關於“慢(man)凍(dong)”，傳統的(de)方(fang)法(fa)，RTE細胞凍存管用棉花包(bao)好(hao)，4度(du)2h，-20度(du)2h或更(geng)長，-80度(du)過夜(ye)，*後液(ye)氮(dan)。對(dui)於條(tiao)件(jian)較(jiao)好(hao)的(de)實(shi)驗(yan)室和細胞凍存數量多(duo)的(de)實(shi)驗(yan)室，推薦使(shi)用程(cheng)序降溫盒，內(nei)裝異(yi)丙(bing)醇(chun)，在(zai)-80度(du)並內(nei)可以逐(zhu)漸降溫，很(hen)方(fang)便(bian)，省(sheng)了包棉(mian)花、4度(du)、-20度(du)了。

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