A9細胞(bao)(二)

A9細胞(二)
　　4. 將細(xi)胞懸液(ye)按 1：2 比例分(fen)到新(xin)的(de)含(han) 8ml 培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中。

　　3）細胞(bao)(A9細(xi)胞)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為類；

　　1. 細胞(bao)(A9細(xi)胞)凍存(cun)時(shi)，棄去(qu)培(pei)養(yang)基後(hou)，PBS 清(qing)洗壹(yi)遍(bian)後(hou)加(jia)入 1ml 胰酶，細胞變(bian)圓(yuan) 脫(tuo) 落(luo)後，加(jia)入 1ml 含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化，可使用血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)板(ban)計數(shu)。

　　2. 4 min 1000rpm 離心去(qu)掉上清(qing)。加(jia) 1ml 血(xue)清(qing)重懸細胞(bao)，根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia) 入血(xue) 清(qing)和 DMSO，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，DMSO 終濃(nong)度(du)為(wei) 10%，細(xi)胞(bao)密度不(bu)低(di)於(yu)1x106/ml，每(mei)支凍存(cun)管凍存(cun) 1ml 細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍 存(cun)管做好(hao)標識(shi)。

　　3. 將凍存(cun)管置(zhi)於(yu)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫(wen)盒中，放(fang)入-80 度冰(bing)箱(xiang)，2 個(ge)小(xiao)時(shi)以(yi)後轉入液(ye)氮灌儲存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿(na)取(qu)。

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