A9細胞(bao)培養操(cao)作

A9細胞(bao)培養操(cao)作

　　1）復蘇細胞(bao)(A9細胞(bao))：將(jiang)含(han)有(you) 1mL 細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加 入 4mL 培養基(ji)混(hun)合(he)均(jun) 勻。在 1000RPM 條件下(xia)離心(xin) 4 分鐘，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu) 加 1-2mL 培養基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入培養瓶中(zhong)培 養過(guo)夜（或(huo)將(jiang) 細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基(ji)，培養過(guo)夜）。**天換(huan)液並(bing) 檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

　　2）細胞(bao)(A9細胞(bao))傳(chuan)代：如果細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培養。      

　　1. 棄(qi)去培養上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de) PBS 潤洗細胞(bao) 1-2 次(ci)。

　　2. 加 1ml 消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu) 37℃培 養箱中消化 1-2 分(fen)鐘，然後在顯微鏡下觀(guan)察細胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大(da)部分 變(bian)圓並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培養 瓶後(hou)加少量培養基(ji)終(zhong)止消 化。  

　　3. 按(an) 6-8ml/瓶補(bu)加培養基(ji)，輕(qing)輕(qing)打勻後吸(xi)出(chu)，在 1000RPM 條件下(xia)離心(xin) 4 分 鐘，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加 1-2mL 培養液(ye)後吹(chui)勻。