磷(lin)酸(suan)化多肽(tai)價(jia)格(ge)及(ji)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)活性(xing)分(fen)析(xi)

磷(lin)酸(suan)化多肽(tai)價(jia)格(ge)及(ji)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)活性(xing)分(fen)析(xi)
蛋(dan)白激(ji)酶(mei)活性(xing)分(fen)析(xi)分(fen)為(wei)兩(liang)步(bu)：

　　①末(mo)端(duan)標記的(de)三磷(lin)酸(suan)核(he)苷核(he)供體(ti)(通(tong)常(chang)是ATP，有時(shi)用GTP)中的(de)(磷(lin)酸(suan)化多肽(tai)價(jia)格(ge))磷(lin)酸(suan)基(ji)團轉(zhuan)移(yi)到蛋(dan)白質或(huo)肽(tai)底物上;

　　②將(jiang)磷(lin)酸(suan)化的底物分(fen)離出並(bing)進(jin)行定(ding)量分(fen)析(xi)。

　　前(qian)者通(tong)常(chang)在(zai)溶(rong)液(ye)中進(jin)行，酶(mei)和底物均在液(ye)相(xiang)中。後(hou)者為(wei)了(le)去(qu)除(chu)遊離的標記核(he)苷酸(suan)，通(tong)常(chang)需(xu)要(yao)用三氯醋酸沈(chen)澱(dian)、SDS-PAGE分(fen)離或使(shi)標記底物結(jie)合(he)於纖維素(su)膜上。

　　有時(shi)可將(jiang)酶(mei)或底物固定(ding)於固相(xiang)載(zai)體(ti)上，如(ru)(磷(lin)酸(suan)化多肽(tai)價(jia)格(ge))蛋(dan)白質混(hun)合物經SDS-PAGE後(hou)轉移(yi)到(dao)硝(xiao)酸(suan)纖維素(su)膜上，然(ran)後(hou)封閉(bi)，放入(ru)含(han)有酶(mei)和標記ATP的(de)溶(rong)液(ye)中。或(huo)者更進壹(yi)步(bu)，設(she)計壹(yi)個(ge)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)分(fen)析(xi)系(xi)統(tong)(酶(mei)活性(xing)的原(yuan)位(wei)分(fen)析(xi))，將(jiang)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)和它(ta)的底物均固定(ding)於硝(xiao)酸(suan)纖維素(su)膜上，這(zhe)壹(yi)方(fang)法可與標準的(de)液(ye)相(xiang)分(fen)析(xi)方(fang)法(fa)達(da)到相(xiang)等(deng)的(de)靈敏度和線性範圍。其分(fen)析(xi)原(yuan)理(li)是含(han)有蛋(dan)白激(ji)酶(mei)活性(xing)的樣(yang)品先(xian)固定(ding)於硝(xiao)酸(suan)纖維素(su)膜上(點(dian)滴或(huo)真空(kong)抽吸(xi))，然(ran)後將(jiang)濾膜浸(jin)入(ru)合(he)適的蛋(dan)白底物溶(rong)液(ye)中，底物蛋(dan)白質與剩(sheng)余的(de)膜結(jie)合(he)位(wei)點(dian)結(jie)合(he)，然後加入(ru)同位(wei)素(su)標記的(de)ATP，作用壹(yi)定(ding)時(shi)間(jian)後(hou)洗(xi)去(qu)膜上未(wei)反(fan)應(ying)的(de)ATP並(bing)終止(zhi)反(fan)應(ying)，參入(ru)物經放(fang)射自(zi)顯影(ying)或(huo)液(ye)閃計數(shu)定(ding)量，與膜結(jie)合(he)的酶(mei)和底物均具有壹(yi)定(ding)的運(yun)動性(xing)，兩者反應(ying)的(de)定(ding)量值(zhi)代(dai)表(biao)磷(lin)酸(suan)化的程(cheng)度。

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