磷酸(suan)化(hua)多(duo)肽(tai)價格(ge)及磷酸(suan)化(hua)多(duo)肽(tai)操作(zuo)步(bu)驟

磷(lin)酸化(hua)多(duo)肽(tai)價格(ge)及磷酸(suan)化(hua)多(duo)肽(tai)操作(zuo)步(bu)驟

操(cao)作步(bu)驟：

　　1.剪壹適當(dang)大小的硝(xiao)酸纖(xian)維素膜(mo)並(bing)劃(hua)成(cheng)25px大小的方(fang)格(ge);

　　2.用(磷酸(suan)化(hua)多(duo)肽(tai)價格(ge))緩(huan)沖(chong)液(ye)A浸濕(shi)膜(mo)並(bing)放(fang)於(yu)壹用同(tong)樣緩沖(chong)液(ye)浸濕(shi)的濾紙上(shang)，使(shi)膜(mo)平(ping)坦(tan);

　　3.用緩沖(chong)液(ye)B(含(han)1mg/ml牛(niu)血(xue)清(qing)白(bai)蛋白(bai))將(jiang)樣品(pin)稀(xi)釋到(dao)合適的濃(nong)度(du)，膜(mo)上(shang)每個點(dian)所(suo)加的樣品(pin)其(qi)激(ji)酶(mei)活性(xing)在(zai)0.5～50pmol單(dan)位(1pmol單(dan)位代(dai)表每分(fen)鐘(zhong)轉移1pmol 32P的酶(mei)量)，當(dang)酶(mei)比活性(xing)在(zai)1μmol/min·mg-1時(shi)則(ze)每個點(dian)應(ying)加純酶0.5～50ng;

　　6.用(磷酸(suan)化(hua)多(duo)肽(tai)價格(ge))緩(huan)沖(chong)液(ye)A 100ml洗膜(mo)4次，空氣(qi)幹(gan)燥(zao)後(hou)進行(xing)放(fang)射自(zi)顯(xian)影。或(huo)切成(cheng)方(fang)塊進行(xing)液(ye)閃計(ji)數定量。

　　該(gai)方(fang)法在(zai)應(ying)用時*常(chang)見的問(wen)題(ti)是硝(xiao)酸纖(xian)維素膜(mo)過(guo)載(指(zhi)總蛋白(bai)或(huo)酶(mei)活力(li)單(dan)位)。硝(xiao)酸纖(xian)維素膜(mo)結合(he)BSA的線(xian)性(xing)範圍(wei)可(ke)達(da)50μg/cm2(相(xiang)當(dang)於(yu)每斑點(dian)5μg)，而結合(he)容量可(ke)達(da)500μg/cm2，如(ru)果(guo)樣品(pin)本身(shen)造(zao)成(cheng)蛋白(bai)質(zhi)超(chao)載(zai)，則(ze)應(ying)降(jiang)低(di)稀(xi)釋液(ye)中的BSA濃(nong)度(du)。同(tong)時應註意不(bu)要加過(guo)量的酶(mei)，因(yin)為超過(guo)50pM單(dan)位即(ji)超過(guo)了該(gai)方(fang)法的線(xian)性(xing)範圍(wei)，並(bing)可(ke)能(neng)影響(xiang)硝(xiao)酸纖(xian)維素膜(mo)鄰(lin)近(jin)斑點(dian)的檢(jian)測。該(gai)方(fang)法用於其(qi)它蛋白(bai)激(ji)酶(mei)檢(jian)測時(shi)應(ying)適當(dang)變(bian)換(huan)測定條件(jian)。因(yin)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)活性(xing)的斑點(dian)印(yin)跡方(fang)法與(yu)標準的液(ye)相(xiang)方(fang)法在(zai)靈(ling)敏(min)度(du)、檢(jian)測範(fan)圍(wei)、線(xian)性(xing)等(deng)方(fang)面相(xiang)當(dang)，所(suo)以(yi)可(ke)以(yi)代替(ti)後(hou)者(zhe)進行(xing)常(chang)規檢(jian)測。也在(zai)天(tian)然凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳(yong)和(he)轉移電泳(yong)後(hou)分(fen)析(xi)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)活性(xing)的分(fen)布(bu)，可(ke)用於分(fen)析(xi)酶(mei)在(zai)不(bu)同(tong)發育(yu)階段(duan)各組(zu)織(zhi)表達(da)的變(bian)化(hua)、cDNA克(ke)隆分(fen)析(xi)和(he)突變體分(fen)析(xi)。

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