ATCC凍(dong)幹(gan)菌(jun)種(zhong)活(huo)化(hua)方法

低(di)溫(wen)保存(cun)管（cryo tube）中之壹(yi)般(ban)菌(jun)種(zhong)臨時(shi)存放(fang)及(ji)活(huo)化(hua)

A. 低(di)溫(wen)保存(cun)管之臨時(shi)存放(fang)及(ji)解凍(dong)

1. 低(di)溫(wen)保存(cun)管（cryo tube）應存(cun)放(fang)於(yu)－20℃ ~ －80℃之(zhi)低(di)溫條件下。

2. 準備 37℃之(zhi) 70﹪（V/V）酒(jiu)精浴(yu)槽（只能(neng)在電氣水(shui)浴(yu)槽中改放(fang)酒(jiu)精，不(bu)可以火加溫(wen)，以(yi)免危(wei)險(xian)；若以(yi) 37℃水(shui)浴(yu)取代，應避(bi)免(mian)水(shui)中微生物(wu)汙(wu)染(ran)），其中事先(xian)安(an)放(fang)小(xiao)試(shi)管架（可放(fang)置 cryotube 之大小(xiao)），液(ye)面不(bu)可高達管塞。

3. 將(jiang) cryotube 從低溫(wen)保(bao)存條件中取出，置於 37℃浴(yu)槽之小(xiao)試(shi)管架上(shang)。

4. 不(bu)斷輕(qing)微搖動(dong) cryotube，液(ye)面不(bu)可高至管塞，直至結冰完全溶解（約(yue)需(xu) 2 分(fen)鐘）。

C. 菌(jun)株活(huo)化(hua): 在無菌(jun)操作(zuo)下(xia)

1. 用(yong)無菌(jun)微量吸管，從已(yi)溶解之(zhi) cryotube 吸(xi)取(qu) 50 ?l（或 1 ~ 2 滴(di)）之(zhi)菌(jun)液(ye)，滴(di)入(ru)固態(tai)指(zhi)定培養(yang)基(ji)（培養(yang)基(ji)編(bian)號及(ji)溫度(du)示(shi)於(yu)菌(jun)株訂購(gou)單(dan)）某(mou)壹邊緣附(fu)近(jin)，以劃(hua)線(xian)法接種(zhong)於培養(yang)基(ji)。

2. 將(jiang)接(jie)種(zhong)好的(de)培養(yang)基(ji)置於指(zhi)定溫(wen)度(du)的(de)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。

D. 圖(tu)示(shi)

（1）金(jin)屬(shu)接種(zhong)環(huan)

（2）平(ping)板(ban)劃(hua)線(xian)法

冷凍(dong)幹(gan)燥(zao)管之(zhi)開管(guan)說(shuo)明

下(xia)列(lie)步驟(zhou)請(qing)在無菌(jun)環(huan)境(jing)下(xia)操(cao)作(zuo)：

1、以(yi)沾(zhan)有(you)70%酒(jiu)精的(de)棉花，擦(ca)拭外(wai)管，在火焰(yan)上(shang)加熱(re)外(wai)管之(zhi)**。

2、滴(di)數滴(di)無菌(jun)水於加熱(re)處(chu)，使外管破裂(lie)，再以硬棒敲(qiao)破**。

3、取(qu)出隔(ge)熱(re)纖維紙和內管，以滅菌過的鑷(nie)子(zi)取出內管之棉塞。

4、（ a ） 適用(yong)於(yu)細菌
用(yong)無菌(jun)吸管，吸(xi)取0.3-0.5 ml指(zhi)定之(zhi)液(ye)體培養(yang)基(ji)，滴(di)入(ru)內管內，並(bing)輕(qing)微震(zhen)蕩(dang)（可用該吸(xi)管(guan)協(xie)助），直到均(jun)勻(yun)懸浮(fu)。
（ b ） 適用(yong)於(yu)黴(mei)菌(jun)、酵(jiao)母菌(jun)
用(yong)無菌(jun)吸管，吸(xi)取0.3-0.5 ml無菌(jun)水，滴(di)入(ru)內管內，待幹(gan)燥(zao)粉末(mo)溶解後(hou)，以(yi)無菌(jun)吸管吸(xi)取並(bing)滴(di)入(ru)約(yue)含(han)有5ml無菌(jun)水之試(shi)管內，輕(qing)微震(zhen)蕩(dang)使其均(jun)勻(yun)後，靜(jing)置30至(zhi)60分(fen)鐘(zhong)。

5、取(qu)0.1-0.2 ml之(zhi)菌(jun)體懸浮(fu)液(ye)於指(zhi)定的(de)平板(ban)培養(yang)基(ji)上(shang)，做(zuo)劃(hua)線(xian)分離(li)培養(yang)或做成壹系(xi)列(lie)之(zhi)稀釋，用無菌(jun)L型(xing)玻(bo)棒均(jun)勻(yun)塗抹，以(yi)檢驗(yan)菌種(zhong)之純(chun)度(du)及(ji)活(huo)化(hua)情形(xing)，而(er)剩余(yu)的(de)菌體則(ze)全部(bu)移(yi)入指(zhi)定的(de)液(ye)體培養(yang)基(ji)內，並(bing)依(yi)指(zhi)定的(de)溫度(du)培養(yang)之(zhi)。

6、某(mou)些菌(jun)種(zhong)經過冷凍(dong)幹(gan)燥(zao)保存(cun)後，遲(chi)滯(zhi)期 （ lag period ） 較(jiao)長，必(bi)須(xu)等(deng)培養(yang)二(er)倍(bei)時(shi)間(jian)後才(cai)能(neng)長出，且再經過壹、二(er)次繼(ji)代培養(yang) （Subculture） 後(hou)才(cai)能(neng)正常生(sheng)長。經(jing)過以上(shang)的(de)努力後仍培養(yang)失(shi)敗，才(cai)視為(wei)不(bu)能(neng)活(huo)化(hua)。

7、若菌(jun)種(zhong)未能(neng)活(huo)化(hua)，或活(huo)化(hua)之菌(jun)落(luo)有(you)疑問時(shi)，請(qing)於收到菌種(zhong)之壹(yi)個月內，以問題(ti)菌株反應單(dan)傳(chuan)真至本中(zhong)心，即(ji)進(jin)行處理(li)。

8．未(wei)開封(feng)之(zhi)冷凍(dong)幹(gan)燥(zao)管，請(qing)冷藏於4℃冰(bing)箱，切(qie)勿(wu)冷凍(dong)保(bao)存。

B. 劃(hua)線(xian)法

1. 手(shou)持(chi)金(jin)屬(shu)接種(zhong)環(huan)，用(yong)酒(jiu)精燈(deng)將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)（共(gong)約(yue) 5 公(gong)分）燒至火(huo)紅(hong)，並(bing)不(bu)斷來(lai)回(hui)燒烤金(jin)屬(shu)固定(ding)桿(gan)之前(qian)約(yue)10 公(gong)分，等(deng)待約(yue) 10 秒(miao)鐘，將接(jie)種(zhong)環(huan)前(qian)端(duan)輕(qing)觸(chu)培養(yang)基(ji)邊緣凝(ning)膠（無菌(jun)體部(bu)份(fen)），待接種(zhong)環(huan)完(wan)全冷卻(que)後，以(yi)環(huan)沾(zhan)黏(nian)菌(jun)滴(di)，由培養(yang)基(ji)邊緣向中央(yang)輕(qing)輕(qing)橫(heng)劃(hua)緊(jin)接的並(bing)行線，直到涵(han)蓋(gai) 1/3 培養(yang)基(ji)為(wei)止（I區(qu)）。

2. 灼(zhuo)燒接種(zhong)環(huan)，待(dai)數秒冷卻(que)後，旋(xuan)轉培養(yang)基(ji)自(zi) I 區(qu)塗布(bu)的(de)邊緣再橫(heng)劃(hua)數條線到未接(jie)種(zhong)的區(qu)域（II區(qu)）。

3. 重(zhong)復(fu) 2. 的動(dong)作(zuo)完(wan)成 III 區(qu)與 IV 區(qu)。

4. 灼(zhuo)燒接種(zhong)環(huan)，將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)歸(gui)位。