DNA實驗技(ji)術(shu)：植(zhi)物(wu)組織(zhi)制備基因(yin)組DNA實驗

1.  收取(qu)10~50 g 新鮮(xian)的植(zhi)物(wu)組織(zhi)。

 

2.  植(zhi)物(wu)組織(zhi)用(yong)冷(leng)的無(wu)菌(jun)水洗(xi)滌(di)、吸幹(gan)，放人(ren)液(ye)氮中(zhong)凍(dong)結(jie)，用(yong)研缽(bo)和(he)研杵研成(cheng)細(xi)粉。
3.  將凍(dong)結(jie)的細(xi)粉放入250 ml 的離(li)心瓶(ping)中，立(li)即加入抽(chou)提(ti)緩(huan)沖液(ye)約每(mei)克植(zhi)物(wu)5~10 ml，輕輕攪拌混(hun)勻(yun)。
4.  加入十(shi)二烷(wan)基肌(ji)氨(an)酸鈉使(shi)終(zhong)濃(nong)度達1%，於(yu)溫(wen)育1~2 h。

 

5.  用(yong)JA-14轉子4℃，5 500 g 離(li)心10min 保(bao)留上(shang)清(qing)，必(bi)要(yao)時(shi)重(zhong)復(fu)此(ci)歩(歩)驟以(yi)除(chu)去(qu)殘渣(zha)。
6.  加人(ren)0.6體(ti)積異丙(bing)醇(chun)，混(hun)合(he)，如(ru)果(guo)看不(bu)見(jian)沈(chen)澱，於(yu)-20℃放置(zhi)30 min，用(yong)JA-14轉子4℃，7 500 g 離(li)心15 min，棄(qi)上(shang)清(qing)。
7.  沈(chen)澱用(yong)9 ml TE緩(huan)沖液(ye)重懸，加入9.7 g 固(gu)體(ti)氯化銫，混(hun)勻(yun)，冰(bing)上(shang)放置(zhi)30 min，用(yong)JA-14轉子，7 500 g 離(li)心10 min，保(bao)留上(shang)清(qing)。

 

8.  加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙(yi)錠，冰(bing)上(shang)放置(zhi)30 min，4℃ 7500 g  離(li)心10min.
9.  將(jiang)上(shang)清(qing)轉入兩個5 ml 的快封超離(li)心管中(zhong)，並(bing)封口。
10.  用(yong)VTi80轉子20℃ 525 000 g 離(li)心4 h，或(huo)20℃，300 000 g 離(li)心過(guo)夜，用(yong)15號(hao)針頭和(he)註(zhu)射器收(shou)集帶。
11.  用(yong)氯(lv)化艷飽和(he)的異丙(bing)醇(chun)重復(fu)抽(chou)提(ti)DNA以(yi)除(chu)去(qu)溴化乙(yi)錠。

 

12.  加入2體(ti)積水(shui)和(he)6體(ti)積100%乙(yi)醇(chun)，混(hun)勻(yun)，-20℃放置(zhi)1 h，用(yong)JA-20或(huo)JA-21轉子4℃，7500 g 離(li)心10 min。

 

13.  沈(chen)澱用(yong)TE緩(huan)沖液(ye)重懸，加入1/10體(ti)積的3 mol/l 乙(yi)酸鈉和(he)2體(ti)積的100%乙(yi)酵重懸，重(zhong)復(fu)離(li)心。
14.  沈(chen)澱晾(liang)幹後(hou)用(yong)TE緩(huan)沖液(ye)重懸

                                                                                    合(he)肥(fei)合(he)肥(fei)星肽生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有限公(gong)司