（壹(yi)）無(wu)菌(jun)操(cao)作前的(de)準備工(gong)作
培(pei)養材料(liao)接種(zhong)時的(de)無(wu)菌(jun)操(cao)作過程(cheng)除(chu)上(shang)述各(ge)項(xiang)消(xiao)毒(du)滅(mie)菌(jun)操(cao)作外，還需(xu)完成(cheng)以(yi)下(xia)無(wu)菌(jun)操(cao)作步驟(zhou)，從(cong)而(er)獲得(de)接種(zhong)的無(wu)菌(jun)培(pei)養材料(liao)。
工(gong)作人員(yuan)無(wu)菌(jun)操(cao)作前需(xu)用(yong)肥(fei)皂(zao)刷(shua)洗雙手及(ji)手臂(bi)，並用(yong)流(liu)水(shui)沖(chong)凈，並對手臂(bi)消毒(du)後(hou)穿(chuan)戴好(hao)滅(mie)菌(jun)工(gong)作服、工(gong)作帽(mao)和(he)口罩，更換拖鞋(xie)，才(cai)能(neng)進入(ru)無(wu)菌(jun)操(cao)作區。如(ru)進(jin)入(ru)層(ceng)流(liu)操(cao)作室進(jin)行(xing)實驗(yan)操(cao)作，應完成(cheng)緩(huan)沖(chong)準備區內的淋浴、壹(yi)次更換(huan)滅(mie)菌(jun)衣(yi)帽(mao)、拖鞋(xie)；手臂(bi)消毒(du)、二(er)次更換(huan)滅(mie)菌(jun)防(fang)護衣(yi)帽(mao)、手套(tao)、拖鞋(xie)等(deng)；再在(zai)風淋(lin)區進行(xing)無(wu)菌(jun)風淋(lin)後(hou)方(fang)可(ke)進(jin)入(ru)層(ceng)流(liu)操(cao)作室。進(jin)入(ru)無(wu)菌(jun)操(cao)作區後(hou)，再(zai)用(yong)70%～75%的(de)酒精擦拭雙手和(he)前臂(bi)，完成(cheng)無(wu)菌(jun)操(cao)作準備工(gong)作。
用(yong)70%～75%酒精擦洗工(gong)作臺(tai)面(mian)後(hou)，將已消(xiao)毒(du)滅(mie)菌(jun)的(de)實驗(yan)用(yong)品(pin)取(qu)出(chu)，並將操(cao)作器械(xie)放(fang)置(zhi)在無(wu)菌(jun)器(qi)械(xie)支(zhi)架上(shang)，然後(hou)開(kai)始(shi)實驗(yan)操(cao)作。在實驗(yan)操(cao)作過程(cheng)中(zhong)，對所有(you)操(cao)作器械(xie)每次使用(yong)後(hou)都(dou)要進行滅(mie)菌(jun)，常(chang)采用(yong)酒精燈火焰灼(zhuo)燒(shao)滅(mie)菌(jun)。
（二(er)）無(wu)菌(jun)操(cao)作步驟(zhou)
準備工(gong)作完(wan)成(cheng)後(hou)，對來自於(yu)自然(ran)生長條(tiao)件(jian)下(xia)的外植體，按上(shang)述培(pei)養材料(liao)消毒(du)方法滅(mie)菌(jun)後(hou)取(qu)出(chu)，放(fang)入(ru)已滅(mie)菌(jun)的(de)培(pei)養皿中(zhong)，然後(hou)置(zhi)超凈工(gong)作臺(tai)酒精燈火焰下(xia)方，用(yong)滅(mie)菌(jun)剪(jian)刀(dao)等器械進行適當(dang)分離、切割(ge)或(huo)其(qi)它處(chu)理後(hou)備用(yong)。
在(zai)酒精燈火焰處(chu)將培(pei)養容(rong)器的(de)瓶塞（蓋）輕(qing)輕打(da)開(kai)，瓶口(kou)在燈焰處(chu)旋(xuan)轉灼(zhuo)燒(shao)，用(yong)鑷(nie)子將培(pei)養材料(liao)置(zhi)入(ru)培(pei)養液上(shang)，將鑷子在(zai)酒精瓶中(zhong)浸(jin)蘸(zhan)酒精，置(zhi)酒精燈上(shang)灼(zhuo)燒(shao)後(hou)放(fang)回支(zhi)架，然後(hou)迅(xun)速灼(zhuo)燎瓶(ping)塞(sai)（蓋）數(shu)秒後(hou)塞(sai)回瓶口(kou)。對繼代(dai)培(pei)養材料(liao)的無(wu)菌(jun)操(cao)作，需(xu)在燈(deng)焰(yan)處打(da)開(kai)瓶塞(sai)（蓋），繼(ji)代(dai)材(cai)料(liao)為(wei)液體培(pei)養細胞(bao)時直接用(yong)滅(mie)菌(jun)吸(xi)管(guan)吸(xi)取培(pei)養細胞(bao)液放入(ru)新(xin)培(pei)養液中(zhong)；繼代(dai)材(cai)料(liao)為(wei)固體(ti)培(pei)養細胞(bao)時用(yong)滅(mie)菌(jun)鑷(nie)子挑(tiao)取(qu)適量材料(liao)置(zhi)新(xin)培(pei)養液上(shang)；繼代(dai)材(cai)料(liao)為(wei)其他組織時，用(yong)滅(mie)菌(jun)剪(jian)刀(dao)或(huo)其(qi)他器(qi)械(xie)進行(xing)培(pei)養材料(liao)適當(dang)切割(ge)後(hou)，用(yong)滅(mie)菌(jun)鑷(nie)子將其置(zhi)於(yu)新(xin)培(pei)養液上(shang)（中(zhong)），然後(hou)迅(xun)速灼(zhuo)燎瓶(ping)塞(sai)（蓋）數(shu)秒後(hou)塞(sai)回瓶口(kou)。
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