ATCC專(zhuan)題：實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術

壓(ya)力蒸(zheng)汽濕熱滅菌(jun)法(fa)是(shi)目(mu)前*常用的壹(yi)種(zhong)滅(mie)菌(jun)方(fang)法。它利用高壓(ya)蒸(zheng)汽以(yi)及(ji)在(zai)蒸(zheng)汽環境(jing)中(zhong)存(cun)在(zai)的潛熱作用和良(liang)好的穿透(tou)力，使(shi)菌(jun)體蛋(dan)白質凝(ning)固(gu)變(bian)性而使(shi)微生(sheng)物(wu)死(si)亡。適(shi)合於布(bu)類工作(zuo)衣(yi)、各(ge)種器(qi)皿、金(jin)屬(shu)器(qi)械、膠(jiao)塞(sai)、蒸餾(liu)水、棉(mian)塞(sai)、紙和某些(xie)培(pei)養液(ye)的滅菌(jun)。高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)器(qi)的蒸汽壓(ya)力壹(yi)般(ban)調(tiao)整(zheng)為(wei)1.0～1.1 kg/cm²，維(wei)持(chi)20～30 min即(ji)可(ke)達(da)到滅(mie)菌(jun)效果(guo)。

3．射線滅菌(jun)法
利用紫(zi)外(wai)線燈進行照(zhao)射滅菌(jun)的方(fang)法。紫(zi)外(wai)線是(shi)壹(yi)種(zhong)低(di)能量(liang)的電(dian)磁(ci)輻(fu)射，可(ke)以(yi)殺(sha)滅(mie)多種微生物(wu)。紫(zi)外(wai)線的作用機(ji)制是(shi)通過對微生物(wu)的核(he)酸(suan)及(ji)蛋白(bai)質(zhi)等的破壞(huai)作(zuo)用而使(shi)其滅(mie)活。適(shi)合於實(shi)驗室(shi)空(kong)氣、地(di)面、操作(zuo)臺面(mian)滅菌。滅(mie)菌時(shi)間為(wei)30 min。用紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌(jun)時(shi)應(ying)註意(yi)，不能邊(bian)照(zhao)射邊(bian)進行實驗操作(zuo)，因(yin)為紫(zi)外(wai)線不僅對人(ren)體皮(pi)膚有傷(shang)害(hai)，而且對(dui)培(pei)養物(wu)及壹(yi)些(xie)試(shi)劑等也會(hui)產生(sheng)**影(ying)響(xiang)。

4．過濾除菌法(fa)（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
是(shi)將(jiang)液(ye)體或(huo)氣(qi)體通(tong)過有微孔(kong)的濾膜過濾，使大於濾(lv)膜孔(kong)徑(jing)的細菌(jun)等(deng)微生(sheng)物顆粒阻(zu)留，從(cong)而達(da)到除菌的方(fang)法。過濾除菌法(fa)大多用於遇(yu)熱易發(fa)生(sheng)分解、變性(xing)而失效的試(shi)劑、酶液(ye)、血(xue)清(qing)、培(pei)養(yang)液(ye)等(deng)。目(mu)前，常用微(wei)孔(kong)濾(lv)膜金(jin)屬(shu)濾器(qi)或(huo)塑(su)料(liao)濾器(qi)正(zheng)壓(ya)過濾除菌，或(huo)用玻(bo)璃細菌(jun)濾(lv)器(qi)、濾球負(fu)壓(ya)過濾除菌。濾(lv)膜孔(kong)徑(jing)應(ying)在(zai)0.22～0.45 μm範圍內(nei)或(huo)用更小的細菌(jun)濾(lv)膜，溶(rong)液(ye)通(tong)過濾膜後(hou)，細菌(jun)和孢子等因(yin)大於濾(lv)膜孔(kong)徑(jing)而被(bei)阻(zu)，並(bing)利用濾(lv)膜的吸(xi)附作(zuo)用，阻(zu)制小於濾(lv)膜孔(kong)徑(jing)的細菌(jun)透(tou)過。

5．化(hua)學(xue)消(xiao)毒劑消(xiao)毒法(fa)（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
用於那(na)些(xie)不能利用物(wu)理方(fang)法進行滅菌(jun)的物品(pin)、空(kong)氣、工(gong)作面、操作(zuo)者(zhe)皮(pi)膚、某些(xie)實(shi)驗器(qi)皿等。常(chang)用的化(hua)學(xue)消(xiao)毒劑包(bao)括甲醛、高錳酸(suan)鉀、70%～75%乙(yi)醇(chun)、過氧(yang)乙(yi)酸(suan)、來蘇(su)爾水、0.1%新潔(jie)爾滅、環氧(yang)乙(yi)烷、碘(dian)伏或(huo)碘(dian)酊等。其中(zhong)利用70%～75%乙(yi)醇(chun)、0.1%～0.2%、10%次(ci)氯(lv)酸鈉、飽和漂等(deng)進行實驗材(cai)料(liao)的滅菌(jun)；利用甲醛加(jia)高錳酸(suan)鉀[（2 mL甲醛+1g高錳酸(suan)鉀）/m³]或(huo)乙(yi)二(er)醇(chun)（6mL/m³）等(deng)加(jia)熱熏蒸(zheng)法(fa)進行無(wu)菌室(shi)和培養室的消(xiao)毒。在(zai)使(shi)用時(shi)應(ying)註意(yi)**，特(te)別(bie)是(shi)用在(zai)皮(pi)膚或(huo)實(shi)驗材(cai)料(liao)上的消(xiao)毒劑，須選用合適(shi)的藥(yao)劑種類、濃度和處理時間(jian)，才(cai)能達(da)到**和滅菌的目(mu)的。

6．抗(kang)生(sheng)素抑菌(jun)法（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
主(zhu)要(yao)用於培(pei)養液(ye)，是(shi)培養(yang)過程中(zhong)預(yu)防微(wei)生(sheng)物汙染(ran)的重要(yao)手(shou)段以(yi)及(ji)作(zuo)為(wei)微生物汙染(ran)不嚴重時(shi)的“急(ji)救(jiu)”措施(shi)。常用的抗(kang)生(sheng)素有青黴(mei)素、鏈(lian)黴(mei)素和新黴素等。

（二(er)）不同種(zhong)類(lei)物品(pin)及培養(yang)物的消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)方(fang)法

1．無(wu)菌操作(zuo)室(shi)滅菌(jun)（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
培(pei)養材料(liao)進行培養(yang)、觀察或(huo)更換培(pei)養(yang)液(ye)時(shi)，必(bi)須從(cong)各(ge)方(fang)面防(fang)止(zhi)任何(he)汙染(ran)物(wu)進入培(pei)養液(ye)或(huo)容(rong)器(qi)，所以(yi)無(wu)菌操作(zuo)室(shi)的滅菌(jun)是(shi)至關重要(yao)的。由於無(wu)菌操作(zuo)室(shi)的汙染(ran)來源(yuan)主(zhu)要(yao)是(shi)空(kong)氣中(zhong)的細菌(jun)和真菌(jun)孢子，因此長期停用後(hou)的無(wu)菌操作(zuo)室(shi)應(ying)進行熏蒸(zheng)滅菌，熏(xun)蒸(zheng)是(shi)用高錳酸(suan)鉀+甲醛[（2ml甲醛+1g高錳酸(suan)鉀）/m³]進行無(wu)菌室(shi)的滅菌(jun)。經(jing)常使用的無(wu)菌操作(zuo)室(shi)，在每(mei)次(ci)使(shi)用前都(dou)應(ying)進行地面(mian)衛生清(qing)潔(jie)，並(bing)用紫(zi)外(wai)線燈照(zhao)射30 min，進行空(kong)氣滅(mie)菌。對超凈工作(zuo)臺，每(mei)次(ci)操作(zuo)前用紫(zi)外(wai)燈照(zhao)射30 min，然(ran)後(hou)用70%～75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)。

2．培(pei)養液(ye)滅(mie)菌（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
培(pei)養液(ye)在(zai)制備過程中(zhong)帶(dai)有各(ge)種雜(za)菌，分裝後(hou)應(ying)立(li)即(ji)滅菌，或(huo)在(zai)24小時內完(wan)成滅菌工序(xu)。目(mu)前常用過濾除菌法(fa)除去培(pei)養(yang)物(wu)操作(zuo)液(ye)和培養液(ye)中(zhong)的細菌(jun)。或(huo)對(dui)培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)耐(nai)熱組(zu)分先進行高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)，然(ran)後(hou)在(zai)無(wu)菌室(shi)加(jia)入經(jing)過過濾除菌的不耐(nai)熱溶(rong)液(ye)，混(hun)勻後(hou)分裝備用。
使(shi)用高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)器(qi)滅菌時(shi)，將(jiang)分裝好的培養(yang)液(ye)放(fang)入底(di)部有壹(yi)定(ding)量(liang)（淹沒加(jia)熱管）涼(liang)水的高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)器(qi)內，增(zeng)壓(ya)至(zhi)0.35~0.4 kg/cm²時(shi)排凈滅菌器(qi)內冷空(kong)氣，以(yi)便使蒸(zheng)汽能到達(da)各(ge)個(ge)消(xiao)毒部(bu)位(wei)，保(bao)證消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)徹底(di)。然(ran)後(hou)繼續加(jia)壓(ya)加(jia)熱，當(dang)壓(ya)力表(biao)讀(du)數達(da)到1.0~1.1 kg/cm²為(wei)121 ºC，保持(chi)15~20 min即(ji)可(ke)。由於消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)取(qu)決(jue)於溫(wen)度而不是(shi)壓(ya)力，所(suo)以(yi)在(zai)壹(yi)定(ding)壓(ya)力下(xia)保(bao)持(chi)較長的消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)時(shi)間是(shi)必(bi)須的。在121 ºC的蒸汽溫(wen)度下(xia)可(ke)以(yi)很(hen)快(kuai)殺(sha)死(si)各(ge)種細菌(jun)及(ji)高度耐(nai)熱的芽孢桿(gan)菌，因此許多培養液(ye)的消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)壓(ya)力、溫(wen)度壹(yi)般(ban)保(bao)持(chi)在(zai)1.0~1.1 kg/cm²、121ºC。消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)時(shi)間與(yu)需要(yao)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)的培養(yang)液(ye)量(liang)密切相(xiang)關（表2-3），時間不足(zu)達(da)不到滅(mie)菌(jun)效果(guo)，時(shi)間過長培(pei)養(yang)液(ye)內(nei)的壹(yi)些(xie)化(hua)學(xue)物(wu)質(zhi)遭(zao)到破(po)壞(huai)，影響(xiang)培養(yang)液(ye)成分。消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)結束(shu)後(hou)，關閉(bi)熱源(yuan)，只有當(dang)滅(mie)菌(jun)器(qi)內壓(ya)力降(jiang)為零時才(cai)能打(da)開放(fang)氣(qi)閥(fa)，排(pai)除剩余蒸汽，取(qu)出(chu)培(pei)養(yang)液(ye)。不可(ke)在壓(ya)力較高時打(da)開放(fang)氣(qi)閥(fa)，引(yin)起(qi)減壓(ya)沸(fei)騰(teng)，使(shi)容(rong)器(qi)中(zhong)液(ye)體溢出(chu)。培(pei)養(yang)液(ye)組(zu)成中(zhong)如(ru)含(han)有遇熱易分解的物質(zhi)，則(ze)需用過濾方(fang)法消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)。首(shou)先對培(pei)養液(ye)中(zhong)耐(nai)熱組(zu)分進行高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)後(hou)放(fang)置在(zai)無(wu)菌場(chang)所(suo)，固(gu)體培(pei)養液(ye)在(zai)40ºC左右瓊脂(zhi)即(ji)將(jiang)凝(ning)結前，加(jia)入經(jing)過過濾除菌的不耐(nai)熱溶(rong)液(ye)，混(hun)勻後(hou)冷(leng)卻(que)備用。液(ye)體培(pei)養液(ye)在(zai)冷卻(que)到室(shi)溫(wen)後(hou)再(zai)加(jia)入過濾除菌溶(rong)液(ye)。過濾除菌時(shi)，使(shi)用孔(kong)徑(jing)為0.22～0.45μm或(huo)更小的細菌(jun)濾(lv)膜。過濾除菌可(ke)利用抽濾裝置或(huo)註射過濾器(qi)進行，所用器(qi)皿均應(ying)進行高壓(ya)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)，溫(wen)度不應(ying)超(chao)過121 ºC。

3．玻(bo)璃器(qi)皿、塑(su)料(liao)器(qi)皿和器(qi)械滅菌(jun)（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
玻(bo)璃器(qi)皿可(ke)進行幹熱滅菌(jun)或(huo)高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)，但在蒸汽滅菌(jun)後(hou)*好(hao)及時(shi)烘(hong)幹水分。對不能進行高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)的塑(su)料(liao)器(qi)皿可(ke)用75%酒(jiu)精浸泡，使(shi)用前在無(wu)菌操作(zuo)臺面(mian)上晾幹的同時(shi)，用紫(zi)外(wai)線重復殺(sha)菌(jun)。實(shi)驗室(shi)還可(ke)以(yi)用環(huan)氧(yang)乙(yi)烷滅(mie)菌袋對塑(su)料(liao)器(qi)皿進行消(xiao)毒，消(xiao)毒後(hou)的器(qi)皿要(yao)充(chong)分散(san)氣2～4小時後(hou)才(cai)可(ke)使用。無(wu)菌操作(zuo)所(suo)用的各(ge)種器(qi)械，壹(yi)般(ban)采用幹(gan)熱或(huo)高壓(ya)蒸(zheng)汽滅菌(jun)，或(huo)用75%酒(jiu)精浸泡，然(ran)後(hou)在(zai)無(wu)菌操作(zuo)臺面(mian)上晾幹的同時(shi)再(zai)用紫(zi)外(wai)線重復殺(sha)菌(jun)；在(zai)使(shi)用期間可(ke)多次(ci)對(dui)其進行酒精燈火焰(yan)灼(zhuo)燒(shao)滅(mie)菌(jun)。

4．培(pei)養材料(liao)的消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)（實(shi)驗室(shi)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)技(ji)術）
采自(zi)動(dong)物(wu)機(ji)體的實驗材(cai)料(liao)，攜帶(dai)著微(wei)生(sheng)物及(ji)雜質，接種前須進行表面(mian)消(xiao)毒滅(mie)菌(jun)，對(dui)內部已(yi)受(shou)微生物(wu)侵(qin)染(ran)的材料(liao)應(ying)予(yu)以(yi)淘(tao)汰(tai)。從(cong)動(dong)物(wu)機(ji)體采集的某些(xie)組(zu)織(zhi)塊(kuai)，須(xu)用消(xiao)毒劑進行浸泡處理，進行表面(mian)消(xiao)毒。常(chang)用消(xiao)毒劑有過氧(yang)化(hua)氫（10~12%，浸泡5~15 min）、過氧(yang)乙(yi)酸(suan)（0.05%，浸泡30 s~1 min）、酒(jiu)精（70~75%，浸泡2 min）。

                                                             合肥合肥星肽(tai)生物(wu)科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)（www.anhuibio.com）